本文刊于：岭南心血管病杂志，，27（02）：-
作者：赵婕，陶蜀杭，王路长，胡琼英
通讯作者：胡琼英
摘要目的
筛选并评价血清循环miR-预测急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction,AMI）后心力衰竭（heartfailure,HF）的诊断价值，以期为AMI的诊疗提供新的生物标志物。
方法
收集年1月至年12月医院40例AMI后HF患者，40例AMI后非HF患者和40名健康对照者。通过实时定量q-PCR筛选候选microRNA（miR），统计分析差异，计算预测价值。
结果
筛选出5个候选microRNAs，经单因素方差分析发现，AMI后HF组的血清循环miR-水平明显低于AMI后非HF组（0.38±0.25vs.0.65±0.33，P0.）。使用miR-预测AMI后HF时，受试者工作曲线（receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC）下面积(areaundertheROC,AUC)为0.（95％CI=0.-0.，P=0.），预测阈值cut-off值为0.45，对应的灵敏度和特异度分别为67.5%和77.5%。
结论
血清循环miR-是预测AMI后HF的新型生物学标志物，但未来仍需进一步扩大样本量进临床研究验证其预测价值。
急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction,AMI）是冠状动脉疾病（coronaryarterydisease,CAD）中最严重的疾病，是心血管疾病发病率和死亡率的主要原因[1]。随着医疗卫生的发展，检测技术的更新，AMI的诊疗已快速发展，大大降低了其发病率。另一方面，虽然大部分AMI患者可成功脱离急性期，但随后逐渐发展成慢性缺血性心脏病，后者全球的患病人数逐年攀升，预后不佳，给家庭和社会带来巨大的负担[2]。因此，寻找一种与AMI后心力衰竭（heartfailure,HF）发生、发展有关的生物标志物，成为AMI患者及时干预的迫切需要。
血清循环微小RNA（miR）是各类细胞在血清中释放的稳定产物，被广泛应用于生命科学各个领域[3]。最近的研究发现血清循环微小RNAs与人类疾病息息相关，成为各种疾病诊断和预后的生物标志[4]。血清循环microRNAs也被证实为心血管疾病潜在的生物标志物[5]，Xue等[6]分析了经皮冠状动脉介入治疗前后的AMI患者血浆循环微小RNAs的变化，发现miR-26a-1,miR-a和miR-a-1在AMI患者血浆中显著增高，可成为AMI诊断的标志物。Yin等[7]分析了老年AMI患者、不稳定型心绞痛（unstableangina,UA）和健康老年人miR表达水平，其中miR-在老年AMI患者血清中高表达，并可通过抑制miR-靶基因（包括PUMA、PTEN、Bax和caspase7）的表达抑制心肌细胞凋亡。Zhang等[8]研究了AMI患者中miR-和miR-的表达情况，并评估了两者作为AMI的潜在生物标志物的诊断价值，受试者工作特征(receiveroperatingcharacteristic,ROC)曲线分析表明，两者对AMI（与健康对照相比）具有重要的诊断价值，ROC曲线下面积（areaunderthecurve,AUC）为0.，尤其是非ST段抬高型心肌梗死(non-ST-segmentelevationmyocardialinfarction,NSTEMI)，AUC为0.。
以上结果显示，已有少量研究miR-与AMI诊断相关，但与AMI预后关系的研究少之又少，基于不同的种族和遗传背景，本研究旨在探索在本地区miR-与AMI预后的相关性，并评价其预测价值，为AMI的早期干预提供一种新的生物标志物。
1资料和方法
1.1研究对象
回顾性收集和分析80例年1月至年12月来我院就诊的新诊断的AMI患者的基本数据，AMI的确诊依据为AMI的第四个通用定义[9]。患者的基本数据包括：年龄、性别等基本信息；实验室检查和图像。本研究通过了本院伦理委员会批准，以书面通知征得所有参与者的同意。
1.2筛选血清循环微小RNAs
检索文献，挖掘筛选出5个候选miR（miR-a、miR-、miR-、miR-和miR-34a）作为AMI后HF的潜在预测因子。小样本临床研究表明这些循环微小RNAs的改变与AMI患者预后不良有关，如短期不良心血管主要事件(majoradversecardiovascularevents,MACE)、左侧心室重构、左心室射血分数(leftventricularejectionfraction,LVEF)等，见图1。
1.3血清循环微小RNAs检测
收集入院时（AMI后第1天）患者外周血，按照试剂盒标准操作从血清中提取总RNA（德国，Qiagen）。按cDNA试剂盒说明书（德国，Qiagen）获得cDNA。应用SYBRGreenmastermix(Biosystems)系统进行实时定量PCR检测，小核RNAU6为内参。每个样本重复检测3次。
1.4统计学分析
将检测的miRs相对表达标准化为U6，计算公式为△Ct=CtmiR平均值—CtRNU6平均值，之后的统计分析用△△Ct法（倍数变化）。连续变量用()表示；分类变量用绝对数和百分比数表示。根据分布情况用t检验或Mann-WhitneyU检验组间的显着性差异。卡方检验或Fisher精确检验用于分类变量检验。绘制ROC曲线分析miR-预测AMI后HF的诊断价值并确定诊断cut-off值。使用SPSS19.0进行统计分析，以P0.05具有统计学差异。
2结果
2.1急性心肌梗死患者人口学特征
共80例AMI患者入选本研究，包括40例AMI后HF患者和40例AMI后非HF患者。AMI后HF组和AMI后非HF组患者临床基线资料比较，差异有统计学意义（P0.05），见表1。
2.2两组患者血清循环微小RNAs水平比较
实时定量PCR检测发现：与对照组相比，5个候选miRs中有4个在AMI患者中明显增高（miR-a、miR-、miR-34a和miR-），但在AMI后HF和AMI后非HF组之间无明显差异。miR-的血清水平是AMI患者中唯一下降的microRNA，且AMI后HF组明显低于AMI后非HF组（P0.），见表2。
2.3血清循环微小RNA-预测AMI后HF的诊断价值
绘制ROC曲线确定miR-预测AMI后HF的诊断效能，发现AUC为0.（95％CI=0.～0.，P=0.），通过约登指数计算找出cut-off值为0.45，此时对应的灵敏度和特异度分别为67.5%和77.5%，此时预测阈值cut-off值为0.4，见图2。
3结论
本研究通过比较miR-在AMI后HF组和AMI后非HF组之间的表达差异，发现AMI后HF组的水平明显低于AMI后非HF组，表明miR-可能与AMI后HF发展密切有关。miR-作为AMI后HF的预测因子，本研究通过绘制ROC曲线分析其预测的准确性，AUC为0.，灵敏度和特异度分别为67.5%和77.5%，对应的cut-off值为0.4。与传统的AMI后HF预测经典标志物BNP相比（有文献报道AUC为0.），其预测价值更佳[10]。另外，本研究发现脑钠肽在AMI后HF组的水平明显高于AMI非HF组，故miR-与BNP联合鉴别诊断AMI后HF和AMI后非HF也是后续扩大样本量研究提高诊断价值的重要思路。
MiR-在淋巴结和脾脏中高表达，在免疫原性、造血和胚胎造血中起着重要的作用，低表达的miR-可能导致自身免疫性疾病和造血系统恶性肿瘤[11]。目前有关miR-的临床研究主要集中在血液系统疾病[11]、肺癌[12]、结肠癌[13]、胃癌等[14]，但对心血管疾病的作用研究较少，目前认为miR-具有保护心肌损伤的作用，并对心脏肥大，或通过各种机制引起的心肌纤维化亦具有保护作用。Scrutinio等[15]研究发现血清循环miR-水平在急性HF患者中明显下调（与稳定期HF患者相比），表明该指标可能成为一种HF的严重程度的潜在生物标志物。Zhang等[8]研究显示AMI患者血浆中miR-和miR-的水平显着高于健康对照，二者对AMI尤其是NSTEMI有重要的诊断价值，联合ROC分析显示，在区分AMI患者和健康对照时AUC值为0.；鉴别NSTEMI患者和健康对照时AUC值为0.。本研究比较AMI后HF组和AMI后非HF组之间miR-的表达差异，得出miR-预测AMI后HF的AUC为0.，与已有文献研究结果一致。
综上所述，miR-可作为AMI后HF的潜在预测因子，但本文由于病例数较少，结果的可靠性仍有待后续大样本验证；同时，后续实验可通过体内外基础研究进一步明确miR-调控AMI预后的作用机制，为AMI的诊断、治疗和预后提供新的靶点和思路。
参考文献（略）
敬请